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「干貨分享」測量pH值——含蛋白質(zhì)的樣品

發(fā)布時間:2022-03-21 14:19:13


在含蛋白質(zhì)的樣品中測量pH值,可能是件相當(dāng)具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)。因為蛋白質(zhì)可能會污染pH電極的玻璃膜和傳統(tǒng)陶瓷芯液絡(luò)部。為獲得精確的pH值讀數(shù),這兩個部件都必須保持最佳狀態(tài)。



蛋白質(zhì)對玻璃膜的污染


在任何的水溶液當(dāng)中,酸都以氫離子的形式存在。pH電極的玻璃膜經(jīng)過特殊設(shè)計,能夠跟這些氫離子互動產(chǎn)生電位差,進(jìn)一步可轉(zhuǎn)換為pH值。為實現(xiàn)與氫離子的互動,玻璃膜必須避免蛋白質(zhì)殘留等污染。任何存在于玻璃上的污染,都會影響與氫離子相互作用的表面區(qū)域,減緩電極的響應(yīng)速度。

電極響應(yīng)速度過慢,會給測量帶來不便。電極所連接的pH計需要根據(jù)時間單位內(nèi)的mV信號變動來判定是否到達(dá)終點。由于mV信號的變動是電極的玻璃膜與溶液中的氫離子作用時所獲得的,因此蛋白質(zhì)所造成的污染可能會對測量值產(chǎn)生影響,帶來測量誤差。當(dāng)電極不含蛋白質(zhì)殘留物時,mV值便會隨著時間推移,對氫離子濃度的變化及時地進(jìn)行變化。經(jīng)過幾秒后, 每秒鐘的mV值變化便會放緩,而在降至儀表的「穩(wěn)定 標(biāo)準(zhǔn)」以下時,便會獲得最終的pH值。

由于玻璃膜可用表面區(qū)域減少,每單位時間的mV值變化會降低。跟干凈的電極一樣,當(dāng)系統(tǒng)達(dá)到平衡點時,受到污染的電極所產(chǎn)生的mV值變化也會隨著時間的推移而放慢。但是,無論電極對溶液的pH值快速響應(yīng)或緩慢響應(yīng),pH計都采取相同的「穩(wěn)定標(biāo)準(zhǔn)」。

陶瓷芯液絡(luò)部的蛋白質(zhì)阻塞


液絡(luò)部和電極玻璃膜一樣容易受到蛋白質(zhì)污染的影響。傳統(tǒng)的陶瓷芯液絡(luò)部,是位于電極玻璃膜上方的一塊玻料。玻料是由小氣孔所構(gòu)成,該設(shè)計可讓電解液流出電極,并流入樣品中。電解液的流動對獲取精確pH結(jié)果非常重要——它會產(chǎn)生穩(wěn)定的參考電位,并且形成電極的回路。如果電解液不能穩(wěn)定地流入樣品,讀數(shù)的錯誤就難以避免。

電解液是濃縮的鹽溶液。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液暴露至鹽水時,蛋白質(zhì)經(jīng)常會沉淀形成固態(tài)物質(zhì)。當(dāng)溶液在進(jìn)行pH 值測量時,會形成鹽梯度,pH電極的液絡(luò)部位置具有最高的鹽濃度。這會讓液絡(luò)部出現(xiàn)蛋白質(zhì)沉淀。隨著蛋白質(zhì)不斷沉淀在陶瓷芯液絡(luò)部處,電解液的流動便會減慢,最后逐漸停止,使pH值讀數(shù)產(chǎn)生錯誤。

如何去除蛋白質(zhì)污染


蛋白質(zhì)污染可從pH電極玻璃膜和陶瓷芯液絡(luò)部上去除。遭到蛋白質(zhì)污染的電極,應(yīng)在5%胃蛋白酶與 0.1 mol/L 鹽酸的混合溶液中浸泡數(shù)小時以進(jìn)行清潔。此溶液能夠分解蛋白質(zhì)沉淀物,并讓液絡(luò)部與玻璃膜保持干凈。經(jīng)常對電極進(jìn)行清潔維護(hù),能夠避免蛋白質(zhì)沉淀在pH電極的關(guān)鍵部件上。在測量高濃度的蛋白質(zhì)溶液后,用上述胃蛋白酶/鹽酸溶液中浸泡電極15分鐘,將能夠清潔玻璃膜與液絡(luò)部。這項例行的清潔方法,能夠讓電極在全部使用周期中,獲得更為精確的結(jié)果。

選擇合適的電極


梅特勒提供專為生物應(yīng)用所設(shè)計的電極。您能夠通過選擇合適的玻璃膜和液絡(luò)部的組合,明顯降低電極受到蛋白質(zhì)污染的可能性。 

InLab? Routine Pro-ISM 

InLab Routine Pro-ISM 是一款標(biāo)準(zhǔn)的pH電極,能夠應(yīng)用于許多實驗室,并且具有陶瓷芯液絡(luò)部。若是使用正確的清潔方式 (胃蛋白酶/鹽酸),這款電極便能夠為含有蛋白質(zhì)的樣品提供相當(dāng)準(zhǔn)確的結(jié)果。

InLab Max? Pro-ISM

InLab Max Pro-ISM的設(shè)計跟InLab Routine Pro-ISM類似,但采用了不可移動套筒式液絡(luò)部,而非陶瓷芯。電解液的流動相當(dāng)快速,液絡(luò)部不易堵塞,電極易于使用。 

InLab? Expert Pro-ISM與Solids Pro-ISM 

InLab Expert Pro-ISM與Solids Pro-ISM pH 電極具有固態(tài)的聚合電解質(zhì)XEROLYT?。電解質(zhì)會通過開放式的液絡(luò)部與樣品直接接觸。因為構(gòu)造當(dāng)中不含陶瓷芯,因此便沒有堵塞的風(fēng)險。所以,在測量含蛋白質(zhì)的樣品時,這兩款電極是最佳的選擇。堅固的針刺形可穿刺電極,相當(dāng)適合測量固態(tài)與半固態(tài)的樣本,比如:肉類、芝士和水果等。


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