百迪NK細(xì)胞無血清培養(yǎng)套裝（滋養(yǎng)層細(xì)胞）Kit
- 品名： 百迪NK細(xì)胞無血清培養(yǎng)套裝（滋養(yǎng)層細(xì)胞）Kit
- 型號： S103-KIT
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
產(chǎn)品信息
| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 1. 第 0 天，滅活血漿制備：采集的血樣需要在 8 小時內(nèi)分離；將抗凝血液樣本 2000rpm 離心 10min，取上層血漿移到新的離心管，56℃條件下滅活 30min，冷卻至室溫，2500rpm 離心 10min，用移液管將上清液采集至新的離心管，加入葡萄糖酸鈣，使其終濃度為 8%，保存在冰箱中，直到使用前取出。 2. 制備 PBMC，應(yīng)用不同淋巴細(xì)胞分離液可根據(jù)相關(guān)說明書操作。 3. 培養(yǎng)基的配制：免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基加入重組人 IL-2 使終濃度為 200IU/ml； 4. 將試劑 A1 置于 37℃快速融化復(fù)蘇，復(fù)蘇時間不宜過長，然后用生理鹽水清洗一次，1400rpm 離心 5 分鐘之后再用 10ml 免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基重懸，加入到 T75 培養(yǎng)瓶中； 5. 將制備好的 PBMC 取 2×107cells 加入 20ml 免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，再加入 1.5ml 滅活的自體血漿，加入到含有試劑 A1 的 T75 培養(yǎng)瓶中混合，置于 37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 6. 第 3 天將培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞液轉(zhuǎn)移到 50ml 離心管中，1400rpm 離心 5min； 7. 吸棄上清液，收集細(xì)胞，添加 30ml 培養(yǎng)基重懸，并添加 1.5ml 自體滅活血漿，轉(zhuǎn)移回原培養(yǎng)瓶中，置于 37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 8. 第 4-6 天，每天觀察細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞懸液顏色或細(xì)胞密度（細(xì)胞濃度為 0.8-1×106/ml）添加培養(yǎng)基，每次添加體積不宜超過現(xiàn)有體積一倍。加液時按 4%、3%、2%的自體血漿加入 NK 細(xì)胞培養(yǎng)液。當(dāng)培養(yǎng)液體積大于 60mL 則轉(zhuǎn)移至 T225 瓶中培養(yǎng)，置于 37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 9. 第 7 天將培養(yǎng)的 NK 細(xì)胞輕輕吹勻，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，將 NK 細(xì)胞轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)袋中，加培養(yǎng)基使 NK 細(xì)胞濃度在 0.8-1.0×106cells/ml，血漿按 1%添加。添加試劑 A2 (37℃復(fù)蘇，然后用生理鹽水清洗一次，1400rpm 離心 5 分鐘之后再用 20ml NK 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基重懸后加入到細(xì)胞培養(yǎng)袋中)，置于 37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)； 10. 第 8-11 天每天觀察或計數(shù)，根據(jù)培養(yǎng)液顏色變化或細(xì)胞濃度添加培養(yǎng)液，血漿按 1%添加使得細(xì)胞濃度在 1×106cells/ml（隨著培養(yǎng)時間推移，細(xì)胞濃度可適量增加）。 11. 當(dāng)細(xì)胞生長至所需數(shù)量時即可進(jìn)行收集使用或凍存。一般情況下，12-13 天收集細(xì)胞最佳。 |
| 注意事項 | 1、 血液采集建議使用肝素鈉抗凝管或枸櫞酸鈉采血袋。 2、 自體血漿會影響細(xì)胞的培養(yǎng)狀態(tài)，建議自體血漿預(yù)留量為 30mL 左右。溶血、高脂肪可能會影響 NK 細(xì)胞的擴(kuò)增。 3、 本試劑僅限用于以獲得自然殺傷細(xì)胞為目的的體外誘導(dǎo)處理，不同批次的試劑組分不能互換使用。 4、 如果試劑外包裝管出現(xiàn)裂縫，應(yīng)立即停止使用。 5、 應(yīng)嚴(yán)格按照貯存要求貯存。 6、 操作過程應(yīng)在無菌環(huán)境下進(jìn)行。必須保證操作過程中使用的所有容器及所有直接接觸細(xì)胞液的器具嚴(yán)格無菌。 7、 本試劑開封后必須一次性使用完畢，不得反復(fù)凍融。 8、 為保證本試劑活性，應(yīng)嚴(yán)格按照常規(guī)細(xì)胞冷凍和復(fù)蘇的要求進(jìn)行操作。細(xì)胞復(fù)蘇過程中嚴(yán)禁直接將凍存管全部浸沒在水浴內(nèi)，建議至少應(yīng)保證管蓋在水浴液面以上。 9、 細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)前 7 天出現(xiàn)細(xì)胞成團(tuán)屬于正?，F(xiàn)象，操作過程請注意不要破壞細(xì)胞團(tuán)。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 |
產(chǎn)品詳情
NK 細(xì)胞無血清培養(yǎng)套裝（滋養(yǎng)層細(xì)胞）是一款專為 NK 細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計的體外擴(kuò)增培養(yǎng)試劑盒，用于 NK 含滋養(yǎng)層細(xì)胞的體外擴(kuò)增培養(yǎng)，套裝組分包括免疫細(xì)胞無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基、試劑 A1、試劑 A2。適用于新鮮提取的抗凝外周血或抗凝臍帶血 NK 細(xì)胞及凍存后 PBMC 中NK 細(xì)胞的體外擴(kuò)增。
暫無內(nèi)容...
