百迪淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基5ml
- 品名： 百迪淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基5ml
- 型號： S203-005
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
產(chǎn)品信息
| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 【適用儀器】 顯微鏡、二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱、離心機(jī)。 【樣本要求】 1. 新鮮抗凝外周血效果最佳，若樣本無法立即接種，將樣本放于2℃-8℃保存，并于5天內(nèi) 接種，超過5天將影響培養(yǎng)效果。 2. 不得使用已產(chǎn)生凝血的外周血樣本。 3. 避免使用溶血、乳穈狀的外周血樣本。 【檢驗(yàn)方法】 1. 接種：每5ml培養(yǎng)基中加入0.4-0.6ml的外周血樣本，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶使樣本與培養(yǎng)基充 分混合。 2. 培養(yǎng)：置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時。 3. 終止培養(yǎng)：向每個培養(yǎng)瓶中加入秋水仙素溶液，使終濃度為0.05-0.1μg/ml，輕輕搖勻后， 放入培養(yǎng)中靜置2-3小時。 4. 收獲細(xì)胞：將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中，1500rpm離心10分鐘。 5. 低滲：棄去上清液，加入37℃預(yù)溫的0.075 mol/L的KCl低滲液8-10ml，混勻使細(xì)胞重 新懸浮，37℃孵化25-35分鐘。 6. 預(yù)固定：以冰醋酸：甲醇=1：3的比例配置固定液。每個離心管中加入1-2ml的固定液， 充分混勻后1500rpm離心10分鐘。 7. 固定：棄去上清，每個離心管中加入8ml的固定液，充分混勻后靜置20-30分鐘，隨后 1500rpm離心10分鐘。 8. 再次固定：棄去上清，每個離心管中加入8ml的固定液，充分混勻后靜置10分鐘，隨后 1500rpm離心10分鐘。并重復(fù)該步驟一次。 9. 制片：將固定后的細(xì)胞懸液調(diào)至合適的濃度滴于用冰水預(yù)冷的載玻片上，每張載玻片上 滴2-3滴，可通過酒精燈外延5-6秒或者輕輕吹散。放入80℃烤箱中烤片2-3小時，或50℃ 過夜烤片。 10. 染色體分帶：玻片從烤箱中取出，室溫冷卻后可進(jìn)行G顯帶和R顯帶分型，吉姆薩染液染 色后顯微鏡下觀察進(jìn)行染色體核型分析。 【陽性判斷值或者參考區(qū)間】 細(xì)胞倍增指數(shù)大于1.5 【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】 1. 固定液每次使用必須新鮮配制，否則將會形成酯類，形成背景較為明顯，從而影響制片 效果； 2. 細(xì)胞培養(yǎng)時間、加入秋水仙素的量以及低滲操作時間等因素都會影響樣品制備效果，需 要根據(jù)實(shí)際樣本及實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。 【檢驗(yàn)方法的局限性】 僅用于培養(yǎng)外周血淋巴細(xì)胞。 |
| 注意事項(xiàng) | 1. 外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基短期內(nèi)可放4-8℃保存，若長期儲存，應(yīng)放-20℃保存，不可反復(fù) 凍融。 2. 本產(chǎn)品只用于體外診斷，操作過程應(yīng)避免污染；操作人員在檢驗(yàn)時應(yīng)做好防護(hù)，預(yù)防疾 病傳播。 3. 試劑包裝如有破損或滴漏，嚴(yán)禁使用。 4. 溶液應(yīng)為澄清，如有沉淀物，嚴(yán)禁使用。 5. 禁止使用超出規(guī)定有效期的產(chǎn)品。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 | 培養(yǎng)基應(yīng)在-20℃避光儲存，有效期為24個月。 |
產(chǎn)品詳情
主要組成成分：RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清、抗生素、植物凝集素、純化水。
檢驗(yàn)原理：人外周血中的淋巴細(xì)胞在正常生理?xiàng)l件下處于G1期或G0期，很難觀察到分裂相，不便于對 其進(jìn)行遺傳學(xué)分析。通過添加促有絲分裂劑，例如植物血凝素（PHA）對淋巴細(xì)胞進(jìn)行刺激 后，可使淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，進(jìn)入分裂期。經(jīng)過短期培養(yǎng)，用秋水仙素進(jìn)行處理即 可得到大量處于有絲分裂中期的細(xì)胞，可用于標(biāo)本制備及后續(xù)的細(xì)胞遺傳學(xué)分析，如染色體 核型分析、染色體畸變、淋巴細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)等。
暫無內(nèi)容...
